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水質(zhì)（糞）大腸菌群快速檢驗(yàn)紙片

 分BD105Ⅰ和BD105Ⅱ兩個(gè)型號(hào)，請(qǐng)注意選擇型號(hào)。

1、適用范圍 水質(zhì)（糞）大腸菌群的測(cè)定紙片快速法

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了總大腸菌群、糞大腸菌群的快速測(cè)定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于地表水、生活污水、醫(yī)療機(jī)構(gòu)及禽畜養(yǎng)殖業(yè)等其他行業(yè)排放的廢水中（糞）大腸菌群的快速篩查。

本方法的檢出限為20MPN/L。

2、    2、規(guī)范性引用文件

本標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容引用了下列文件或其中的條款。凡是不注明日期的引用文件，其有效版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。HJ/T91地表水和污水監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范

3、     3、術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

3.1總大腸菌群（total coliforms）

在37℃培養(yǎng)，24h內(nèi)能發(fā)酵乳糖酸產(chǎn)氣的需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌。

3.2          糞大腸菌群（fecal coliforms）

44.5℃培養(yǎng)，24h內(nèi)能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸氣的總大腸菌群，屬糞行來(lái)源，稱為糞大腸菌群。

4、方法原理

將一定量的乳糖、指示劑（溴甲酚紫和2，3, 5-氯化三苯基四氮唑即TTC）以及營(yíng)養(yǎng)成分等吸附于一定面積的無(wú)菌濾紙上，當(dāng)細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖時(shí)，產(chǎn)酸使PH值降低，溴甲酚紫指示劑由紫色變黃色。同時(shí)，產(chǎn)氣過(guò)程相應(yīng)的脫氫酶在適宜的PH范圍內(nèi)，催化底物脫氫還原TTC形成紅色的不溶性三苯甲臜（TTF），即可在產(chǎn)酸后的黃色背景下顯示出紅色斑點(diǎn)（或紅暈）。通過(guò)上述指示劑的顏色變化就可對(duì)是否產(chǎn)酸產(chǎn)氣作出判斷，從而確定是否有（糞）大腸菌群存在，再通過(guò)查MPN表就可得出相應(yīng)（糞）大腸菌群的濃度值。

5、試劑和材料

除非另有說(shuō)明，分析時(shí)均使用符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的分析純化學(xué)試劑。

5.1市售水質(zhì)總大腸菌群、糞大腸菌群測(cè)試片：10ml水樣量紙片按附錄A的方法進(jìn)行質(zhì)量鑒定，達(dá)到要求后方可使用。

5.2無(wú)菌水

用新制備的去離子水或蒸餾水，按無(wú)菌操作要求，121℃高壓蒸汽滅菌20min，備用。

5.3硫代硫酸鈉溶液：ρ(Na₂S₂O₃)=0.10g/ml

稱取硫代硫酸鈉10g，溶于適量蒸餾水（或去離子）中，稀釋至100ml，現(xiàn)配。

5.4乙二胺四乙酸二鈉（EDTA- Na₂）溶液：ρ(C₁₀H₁₄N₂O₈Na_2。 2H₂O)=0.15g/ml

稱取EDTA-Na₂ 15g,溶于適量蒸餾水（或去離子水）中，稀釋至100ml，此溶液保質(zhì)期為30d。

6         6、 儀器和設(shè)備

6.1     恒溫培養(yǎng)箱：37℃±1℃。

6.2     恒溫培養(yǎng)箱：44℃±0.5℃。

6.3     高壓蒸汽滅菌器：121℃、101.3kpa。

6.4     冰箱：0-4℃

6.5     移液管：1±0.01ml、10±0.1ml。

6.6     試管：φ15mm×150mm.

6.7     采樣瓶：500ml。

注1：移液器、試管、采樣瓶等玻璃器皿實(shí)驗(yàn)前要按無(wú)菌操作要求包扎，121℃高壓蒸汽滅菌20min，烘干，備用。

6          7、樣品

用滅菌器具，按照HJ/T 91的規(guī)定及無(wú)菌操作的要求，采集水樣400ml放入已滅菌的采樣瓶中。如果是經(jīng)加氯處理的廢水，需在采樣瓶滅菌前加入乙二胺四乙酸二鈉（EDTA- Na₂）溶液（5.4）1.2ml，以消除干擾。酸性樣品，需調(diào)節(jié)胖胖的PH值至7.0-8.0。

采樣后2h內(nèi)檢測(cè)，否則，需10℃以下冷藏并6h內(nèi)送檢，實(shí)驗(yàn)室接樣后，應(yīng)將樣品放入0-4℃冰箱并2h內(nèi)測(cè)定。

注2:10mg硫代硫酸鈉可保證去除水樣中1.5mg余氯，硫代硫酸鈉用量克根據(jù)水樣實(shí)際余氯量調(diào)整。

7          8、分析步驟

8.1接種量

每個(gè)樣品按三個(gè)不同的接種量接種，每個(gè)接種量分別接種5張紙片，共接種15張紙片。

根據(jù)水樣的污染程度確定接種量，應(yīng)盡可能使5個(gè)接種量最大的紙片為陽(yáng)性、5個(gè)接種量最小的紙片為陰性。

清潔水樣的參考接種量分別為10 ml、1 ml、0.1 ml，受污染水樣參考接種量根據(jù)污染程度可接種1 ml、0.1ml、0.01 ml或0.1 ml、0.01 ml、0.001 ml等，見下表1。

表1水樣接種量參考表

接種量小于1ml時(shí)，水樣應(yīng)制成稀釋樣品后使用。接種量為0.1ml、0.01 ml時(shí)，分別制成1:10稀釋樣品、1:100稀釋樣品。其它接種量的稀釋樣品依次類推。

1:10稀釋樣品的制作方法為：吸取1ml水樣，注入盛有9 ml無(wú)菌水的試管中，混勻，制成1:10稀釋樣品。其它稀釋度的稀釋樣品同法制作。

8.2接種、培養(yǎng)

水樣充分混勻，按無(wú)菌操作制作稀釋水樣及接種水樣。

清潔水樣，接種水樣總量為55.5ml，10 ml水樣量紙片5張，每張接種水樣10ml，1 ml水樣量紙片10張，其中5張各接種水樣1ml，另5張各接種1:10的稀釋水樣1ml。受污染水樣，接種3個(gè)不同稀釋度的1ml稀釋水樣各5張。

接種水樣應(yīng)均勻涂布于紙片上，紙片充分侵潤(rùn)、吸收水樣，用手輕輕壓平，做好標(biāo)記。

測(cè)總大腸菌群時(shí)，在37±1℃的條件下培養(yǎng)18-24h后觀察結(jié)果；測(cè)糞大腸菌群時(shí)，在44.5±0.5℃的條件下培養(yǎng)18-24h后觀察結(jié)果。

注3：1、檢測(cè)糞大腸菌群時(shí)，紙片接種后應(yīng)立即放置于44.5±0.5℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，在常溫下放置過(guò)久將影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

     2、紙片加入水樣后，短時(shí)間內(nèi)變黃或退色，表明水樣存在酸性物質(zhì)活氧化劑干擾，需按“7樣品”一節(jié)方法去除相應(yīng)干擾。

8.3結(jié)果判定

（1）紙片上出現(xiàn)紅斑或紅暈且周圍變黃，為陽(yáng)性。

（2）紙片全片變黃，無(wú)紅斑或紅暈，為陽(yáng)性。

（3）紙片部分變黃，無(wú)紅斑或紅暈，為陰性。

（4）紙片的紫色背景上出現(xiàn)紅斑或紅暈，而周圍不變黃，為陰性。

（5）紙片無(wú)變化，為陰性。

  結(jié)果判斷參照?qǐng)D片見附錄B。

6          9、結(jié)果計(jì)算與表示

6.1     9.1結(jié)果計(jì)算

   根據(jù)不同接種量的陽(yáng)性紙片數(shù)量，查MPN表（附錄C），經(jīng)下面的公司換算報(bào)告1L水中（糞）大腸菌群數(shù)：

6.2     9.2結(jié)果表示

   測(cè)定結(jié)果保留二位有效數(shù)字，大于100時(shí)以科學(xué)計(jì)數(shù)法表示，結(jié)果的單位為MPN/L。平均值以幾何平均計(jì)算。

7         10、 精密度和準(zhǔn)確度

微生物檢測(cè)書記為偏態(tài)分布，按其統(tǒng)計(jì)分析要求，其檢測(cè)所得MPN值全部經(jīng)對(duì)數(shù)（以10為底）轉(zhuǎn)換后進(jìn)行以下分析。

10.1精密度

6家實(shí)驗(yàn)室分別對(duì)有證標(biāo)準(zhǔn)樣品（15600MPN/L）、低濃度（4.0×10² MPN/L）、中濃度（1.0×10⁴ MPN/L）、高濃度（8.0×10⁴MPN/L）實(shí)際樣品的總大腸菌群進(jìn)行了測(cè)定，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍分別為：4.5%～7.5%、3.5%～12.4%、4.5%～6.9%、2.8%～5.8%；實(shí)驗(yàn)室間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍分別為：3.3%、12.6%、4.6%、1.6%；重復(fù)限為0.61、0.67、0.67、0.64；再現(xiàn)性限為1.09、0.81、0.66、0.69。

6家實(shí)驗(yàn)室分別對(duì)有證標(biāo)準(zhǔn)樣品（12100MPN/L）、低濃度（1.0×10² MPN/L）、中濃度（4.0×10³ MPN/L）、高濃度（5.0×10⁴ MPN/L）實(shí)際樣品的糞大腸菌群進(jìn)行了測(cè)定，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍分別為：4.5%～11.3%、11.4%～31.3%、2.8%～21.5%、3.9%～13.2%；實(shí)驗(yàn)室間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為5.2%、14.8%、11.9%、8.2%。重復(fù)性限為0.93、0.83、0.85、0.77；再現(xiàn)性限為1.28、1.44、1.35、0.89。

10.2           10.2準(zhǔn)確性

6家實(shí)驗(yàn)室對(duì)總大腸菌群有證標(biāo)準(zhǔn)樣品（15600MPN/L）進(jìn)行測(cè)定，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對(duì)誤差的范圍是-5.5%~-12.8%，相當(dāng)誤差的最終值為-8.8%±6.0%。

6家實(shí)驗(yàn)室對(duì)糞大腸菌群有證標(biāo)準(zhǔn)樣品（12100MPN/L）進(jìn)行測(cè)定，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對(duì)誤差的范圍是-3.8%~-16.0%，相對(duì)誤差的最終值為-10.3%±9.2%。

11              11、 質(zhì)量保證和質(zhì)量控制

11.1應(yīng)使用質(zhì)量鑒定合格的紙片。

11.2每批樣品應(yīng)用無(wú)菌水做全程序空白測(cè)定，培養(yǎng)后的紙片上不的有任何微生物生長(zhǎng)，否則，該次樣品測(cè)定結(jié)果無(wú)效，應(yīng)查明原因后重新測(cè)定。

11.3每批樣品應(yīng)使用有證標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行陽(yáng)性、陰性對(duì)照試驗(yàn)�？偞竽c菌群測(cè)定的陽(yáng)性菌株為大腸埃希氏菌，陰性菌株為金黃色葡萄菌；糞大腸菌群測(cè)定的陽(yáng)性菌株為大腸埃希氏菌，陰性菌株為產(chǎn)氣腸桿菌。

上述標(biāo)準(zhǔn)菌株均制成濃度為300~3000個(gè)/ml的菌懸液，分別取相應(yīng)水量的菌懸液接種紙片，按“8.2接種、培養(yǎng)”一節(jié)的要求培養(yǎng)，大腸埃希氏菌應(yīng)呈現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)；金黃色葡萄球菌、產(chǎn)氣腸桿菌應(yīng)呈現(xiàn)陰性反應(yīng)，否則，該次樣品測(cè)定結(jié)果無(wú)效，應(yīng)查明原因后重新測(cè)定。

12                 12、廢棄處理

使用后的器皿及廢棄物須用121℃高壓蒸汽滅菌20min后，器皿方可清洗，廢棄物作為普通垃圾處理。

微生物 快速檢測(cè)產(chǎn)品展示

菌落總數(shù)快速測(cè)試紙片 大腸菌群快速測(cè)試片 大腸桿菌大腸菌群測(cè)試片 霉菌酵母菌快速檢驗(yàn)卡 餐具大腸菌群檢驗(yàn)紙片 食品大腸菌群檢驗(yàn)紙片 水質(zhì)大腸菌群檢驗(yàn)紙片 飲用水大腸菌群檢驗(yàn)紙片 沙門氏菌測(cè)試片 金黃色葡萄球菌測(cè)試片 大腸桿菌0157測(cè)試片 副溶血弧菌測(cè)試片 水質(zhì)（糞）大腸菌群快速 檢驗(yàn)紙片(BD105I) 水質(zhì)（糞）大腸菌群快速 檢驗(yàn)紙片(BD105II) 阪崎腸桿菌測(cè)試片 阪崎腸桿菌快速增菌劑 大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測(cè)試片 蠟樣芽孢桿菌測(cè)試片 大腸桿菌STEC測(cè)試片 糞鏈球菌測(cè)試片（BF401) 手持式ATP熒光檢測(cè)儀 食品微生物采樣檢測(cè)箱 水質(zhì)微生物采樣檢測(cè)箱 餐飲具衛(wèi)生采樣檢測(cè)箱 　 微生物培養(yǎng)箱系列 高壓滅菌鍋 實(shí)驗(yàn)室用顯色培養(yǎng)基系列

開展微生物測(cè)試片測(cè)試工作必備的常用實(shí)驗(yàn)室器材明細(xì)單

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